黃原膠是由黃單胞菌產(chǎn)生的一種微生物高分子酸性胞外雜 多糖，在食品、石油、醫(yī)藥、日用化工等十幾個(gè)領(lǐng)域有著極其 廣泛的應(yīng)用。國內(nèi)現(xiàn)有的產(chǎn)黃原膠菌種的黃原膠產(chǎn)率不高，制 約了黃原膠生產(chǎn)廠家的經(jīng)濟(jì)效益，使這些廠家在與國外黃原膠 生產(chǎn)廠家的競爭中處于劣勢。篩選并對(duì)黃單胞菌進(jìn)行誘變育種， 是提高黃原膠產(chǎn)率，提高黃原膠生產(chǎn)廠家競爭力和經(jīng)濟(jì)效益的 最重要途徑。亞硝酸是一種良好的誘變劑，其誘變機(jī) 理是：亞硝酸主要作用于微生物的DNA,脫去堿基上的氨基而 造成突變。本文利用亞硝酸誘變處理黃單胞菌菌株，篩選黃原 膠高產(chǎn)黃單胞菌突變株，為提高黃原膠產(chǎn)率提供條件。
(1)初篩：參照出發(fā)菌株篩選方法對(duì)亞硝酸誘變得到的突變株進(jìn)行初篩。
(2)搖瓶發(fā)酵：取培養(yǎng)后的菌液2.5 mL接人100 mLYGB培 養(yǎng)基的錐形瓶中，在28 t、180 rpm環(huán)境條件下?lián)u床培養(yǎng)。
(3)黃原膠的提取：將發(fā)酵所得的發(fā)酵液于10 000 rpm 離心30 min，取上清液，加人2倍體積的95%乙醇，邊加邊 攪拌。在攪拌過程中，玻璃棒上會(huì)慢慢有絮狀物體聚集，待絮 狀物聚集完畢，將絮狀沉淀捏干取出后于通風(fēng)櫥干燥1.5h， 然后用電子天平稱重，計(jì)算其產(chǎn)膠率。
一般認(rèn)為，野生菌株采用殺菌致死率在90%及以上的大 劑量誘變處理，單位存活菌數(shù)少，可提高篩選效率，在數(shù)量不多的正變株中有可能篩選到產(chǎn)量提高幅度大的突變株。
據(jù)亞硝酸濃度與黃單胞菌致死率關(guān)系的直線回歸方程，致死 率為90%的亞硝酸濃度是231mmol/L;本實(shí)驗(yàn)選用250 mmol/L 的亞硝酸濃度進(jìn)行誘變處理，以確保黃單胞菌致死率略大于 90%，提高篩選效率。
誘變的效果與誘變致死率有重要的相關(guān)關(guān)系。通常認(rèn) 為致死率低于70%時(shí)的突變株正變率比較高，有利于篩選高產(chǎn)突變株。盡管致死率低于70%時(shí)，正變產(chǎn)量的突變株占突 變株總數(shù)的比例高，但由于致死率低，存活的細(xì)菌數(shù)量多，突 變株占存活細(xì)菌總數(shù)的比例很小，因此，用存活細(xì)菌總數(shù)來計(jì) 算總正變率時(shí)，低致死率誘變的總正變率實(shí)際上比高致死率誘 變的總正變率更低。另外，致死率高，存活菌少，可以大大減 少篩選工作量，加快篩選工作進(jìn)度，故本實(shí)驗(yàn)采用90%以上 的高致死率誘變方法。